PROCEDIMENTO PER L'ISOLAMENTO E L'ESPANSIONE DI CELLULE STAMINALI CARDIACHE DA BIOPSIA
Application number :
102003901134757
Priority date :
31/07/2003
E' descritto un procedimento per ottenere cellule staminali in grado di riparare danni del tessuto miocardico comprendente i passaggi di:
- prelevare un campione bioptico da tessuto cardiaco e tenerlo in opportuno terreno di coltura;
- trattare il campione bioptico in opportune condizioni con blandi mezzi meccanici, e/o chimici, e/o enzimatici per ottenere frammenti di campione di dimensioni tali da consentire il passagggio per diffusione delle sostanze nutritive presenti nel terreno di coltura;
- assicurare i frammenti tessutali su supporti solidi adeguati e mantenerli in un terreno di coltura in presenza di siero e/o di fattori di crescita adeguati;
- lasciare crescere le cellule, rinnovando parzialmente o totalmente il terreno di coltura, fino a che si formano strutture multicellulari o totalmente il terreno di aderenti al supporto;
- separare le strutture multicellulari debolmente aderenti o non aderenti al supporto del resto della coltura;
- trattare le strutture mediante balnde condizioni dissocianti fino a ottenere il distacco della maggior parte delle piccole cellule sferiche fortemente rifrangenti, che conservino tali caratteristiche morfologiche e funzionali;
- piastrare le cellule su substrati per coltura trattati con polilisina o con altri agenti favorenti l'adesione delle colture al supporto in unterreno di coltura comprendente almeno i costituenti minimi essenziali per colture cellulari di mammifero;
- eventualmente ripetere almeno una volta le fasi da d) a g);
- selezionare le cellule che si aggregano in formazionei sferoidali rigrangenti (cardiosfere);
- eventualmente favorire la formazione di nuove cardiosfere per dissociazione blanda di esse e nuova formazione;
- eventualmente criopreservare le cardiosfere formatesi per riutilizzarle dopo scongelamento.
Holders
Sapienza 100%
Inventors
Giacomello Alessandro, Messina Elisa, Battaglia Massimo, Frati Giacomo
Classification
Chemistry & Biotechnology
State of development
Licenziato